光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
光度計(jì)由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，根據(jù)這一特性，可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析。由于物質(zhì)濃度的不同，吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度也不相同，從而通過(guò)對(duì)物質(zhì)吸光度或透過(guò)率的測(cè)量判定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
光度計(jì)使用的方法與步驟：
?。?）預(yù)熱儀器：
為使測(cè)定穩(wěn)定，將電源開(kāi)關(guān)打開(kāi)，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測(cè)定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開(kāi)，使光路切斷。
?。?）選定波長(zhǎng)：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長(zhǎng)。
?。?）固定靈敏度檔：
根據(jù)有色溶液對(duì)光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2～0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動(dòng)靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不再變動(dòng)。一般測(cè)量固定在“1”檔。
?。?）調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)：
輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處（此時(shí)，比色皿暗箱蓋是打開(kāi)的，光路被切斷，光電管不受光照）。
?。?）調(diào)節(jié)T=100：
將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100，即，表頭指針恰好指在T=100處。
?。?）測(cè)定：
輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時(shí)表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華，讀數(shù)后，打開(kāi)比色皿暗箱蓋。
?。?）關(guān)機(jī)：
實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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